Τετραμεθυλοβενζιδίνη CAS 54827-17-7

Στον τομέα της κλινικής in vitro διάγνωσης, το TMB είναι το βασικό χρωμογόνο υπόστρωμα της-συνδεδεμένης ανοσοπροσροφητικής ανάλυσης (ELISA) και το βασικό λειτουργικό συστατικό της συντριπτικής πλειοψηφίας των κιτ ανοσοδοκιμών. Στη σκηνή της ορολογικής ανίχνευσης μολυσματικών ασθενειών, τα κιτ ELISA για τον έλεγχο μολυσματικών ασθενειών όπως ηπατίτιδα BB, αντίσωμα ηπατίτιδας C και αντίσωμα AIDS με βάση το χρωμογόνο σύστημα TMB, με εξαιρετικά χαμηλό χρώμα φόντου και υψηλή ευαισθησία ανίχνευσης, έχουν γίνει το βασικό τεχνικό σύστημα για μεγάλης κλίμακας{{2} έλεγχο αίματος σε οικιακούς σταθμούς αίματος.

Τα δεδομένα εφαρμογής των οικιακών σταθμών αίματος δείχνουν ότι το ελάχιστο όριο ανίχνευσης του επιφανειακού αντιγόνου της ηπατίτιδας ΒΒ μπορεί να φτάσει το 0,1 IU/mL με το κιτ ανίχνευσης αίματος χρησιμοποιώντας το TMB ως χρωμογόνο υπόστρωμα.

Σε σύγκριση με το παραδοσιακό χρωμογόνο σύστημα OPD, το ποσοστό ψευδώς αρνητικών χαμένων διαγνωστικών μειώνεται κατά 90%, εμποδίζοντας πλήρως τον κίνδυνο μετάδοσης μολυσματικών ασθενειών που σχετίζονται με τη μετάγγιση από την πηγή. Σε τακτικούς ελέγχους μολυσματικών ασθενειών εξωτερικών ασθενών σε τριτοβάθμια νοσοκομεία, το κιτ ELISA χρωματομετρικού συστήματος TMB ελέγχει τη διαφορά μεταξύ παρτίδων των αποτελεσμάτων ανίχνευσης εντός 5%, διπλασιάζει την ταχύτητα ανίχνευσης σε σύγκριση με τις παραδοσιακές μεθόδους και μπορεί να ολοκληρώσει δοκιμές υψηλής απόδοσης χιλιάδων δειγμάτων την ημέρα.

Καλύπτει τέλεια τις ανάγκες πρώιμου ελέγχου μολυσματικών ασθενειών σε πληθυσμούς μεγάλης-κλίμακας. Στην κλινική ανίχνευση ορμονών και δεικτών όγκου, τονίζεται περαιτέρω το πλεονέκτημα υψηλής ευαισθησίας του χρωματομετρικού συστήματος TMB. Στην ανίχνευση δεικτών ορμονικής λειτουργίας του θυρεοειδούς όπως TSH, T3, T4 κ.λπ., το δυναμικό γραμμικό εύρος της ανάπτυξης χρώματος TMB είναι τρεις φορές ευρύτερο από τα παραδοσιακά αντιδραστήρια ανάπτυξης χρώματος, τα οποία μπορούν να καλύπτουν με ακρίβεια το πλήρες εύρος συγκέντρωσης από υγιή άτομα έως ασθενείς με υπερθυρεοειδισμό και υποθυρεοειδισμό, αποφεύγοντας τους ψευδείς συναγερμούς που προκαλούνται από φαινόμενα αγκίστρου σε δείγματα υψηλής συγκέντρωσης.

Στην κλινική ανίχνευση καρκινικών δεικτών, το κιτ ELISA με βάση το TMB μπορεί να ανιχνεύσει με ακρίβεια δείκτες όγκου όπως CEA και AFP με συγκέντρωση μόνο μερικών ng/mL στον ορό, παρέχοντας αξιόπιστα ποσοτικά αποτελέσματα για έγκαιρο έλεγχο και μετεγχειρητική παρακολούθηση υποτροπής του καρκίνου.

Στατιστικά δεδομένα από το παθολογικό τμήμα ενός τριτοβάθμιου νοσοκομείου στην Κίνα δείχνουν ότι το ποσοστό ανίχνευσης πρώιμων γαστρεντερικών όγκων με χρήση του σχήματος ανίχνευσης συνδυασμού δεικτών όγκου TMB είναι 25% υψηλότερο από τις παραδοσιακές μεθόδους. Στο σενάριο της βοηθητικής διάγνωσης της ταχείας ανίχνευσης του αντιγόνου COVID-19, το TMB, ως το βασικό συστατικό της ενζυμικής ανάπτυξης χρώματος εκτός από τη μέθοδο κολλοειδούς χρυσού.

Εφαρμόζεται στο σύστημα ανίχνευσης ELISA υψηλής απόδοσης-για το αντιγόνο COVID-19. Η ευαισθησία ανίχνευσης είναι κατά μία τάξη μεγέθους υψηλότερη από αυτή της παραδοσιακής μεθόδου κολλοειδούς χρυσού, η οποία μπορεί να επιτύχει θετική ανίχνευση στο στάδιο του χαμηλού ιικού φορτίου, μειώνοντας σημαντικά το ποσοστό μη διάγνωσης των πρώιμων μολυσμένων ατόμων. Στο υποστηρικτικό σύστημα της πλήρως αυτοματοποιημένης ανοσοδοκιμασίας χημειοφωταύγειας, το TMB, ως βελτιωμένο υπόστρωμα για την άμεση χημειοφωταύγεια της υπεροξειδάσης χρένου (HRP), μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την ένταση και τη σταθερότητα του σήματος φωταύγειας, να αυξήσει το σήμα-προς{8}τον έλεγχο της ημιφωταύγειας κατά την αναλογία ημιφωτεινότητας 4 φορές, το αποτέλεσμα ανίχνευσης εντός 3%, ανταποκρίνεται πλήρως στις απαιτήσεις ανίχνευσης υψηλής ακρίβειας-του υπερσύγχρονου πλήρως αυτοματοποιημένου εξοπλισμού ανοσοπροσδιορισμού.

Στον τομέα της βιολογικής έρευνας,τετραμεθυλοβενζιδίνηείναι το προτιμώμενο χρωμογόνο υπόστρωμα για τα επισημασμένα με HRP δευτερογενή αντισώματα σε πειράματα Western blot και είναι ένα από τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα χρωμογόνα αντιδραστήρια σε εργαστήρια μοριακής βιολογίας. Σε παραδοσιακά πειράματα Western Blot, η χρήση χρωματομετρικού συστήματος ενισχυμένης χημειοφωταύγειας TMB μπορεί να ανιχνεύσει πρωτεΐνες στόχους τόσο χαμηλά όσο το επίπεδο pg.

Σε σύγκριση με την παραδοσιακή χρωματομετρική μέθοδο DAB, η ευαισθησία ανίχνευσης αυξάνεται κατά δύο τάξεις μεγέθους και μπορεί εύκολα να αναγνωρίσει τις αλλαγές έκφρασης των πρωτεϊνών της οδού σηματοδότησης χαμηλής αφθονίας και των παραγόντων μεταγραφής στα κύτταρα. Συγκριτικά πειραματικά δεδομένα από εργαστήριο βιολογίας ενός εγχώριου πανεπιστημίου δείχνουν ότι χρησιμοποιώντας βελτιστοποιημένο διάλυμα φωταύγειας υψηλής ευαισθησίας TMB, ο χρόνος ανάπτυξης του Western Blot μειώθηκε από τα παραδοσιακά 30 λεπτά σε λιγότερο από 10 δευτερόλεπτα, με καθαρές ζώνες φόντου και χωρίς ακαθαρσίες. Δύο παρόμοιες ζώνες πρωτεϊνών με διαφορά μοριακού βάρους μόνο 1 kDa μπορούν να διακριθούν σαφώς, βελτιώνοντας σημαντικά την αξιοπιστία των πειραμάτων ανοσοστύπωσης πρωτεΐνης.

Στα πειραματικά σενάρια της ανοσοϊστοχημείας και της ανοσοϊστοχημείας, το βελτιωμένο σύστημα χρώσης TMB μπορεί να δημιουργήσει σταθερά μπλε αδιάλυτα προϊόντα, να εντοπίσει με ακρίβεια τις θέσεις έκφρασης των πρωτεϊνών-στόχων σε φέτες ιστού και κυτταρικές πλάκες. Σε σύγκριση με την παραδοσιακή καστανοκίτρινη χρώση DAB, τα προϊόντα χρώσης μπλε TMB σχηματίζουν μια απαλή χρωματική διάκριση με τους μπλε μοβ πυρήνες που έχουν χρωματιστεί με αιματοξυλίνη, χωρίς τα κοινά προβλήματα διάχυσης των άκρων και μη ειδικών προβλημάτων χρώσης φόντου της χρώσης DAB. Στα πειράματα εντοπισμού πρωτεΐνης νευροδιαβιβαστή σε νευρικό ιστό και ερμηνεία έκφρασης πρωτεΐνης PD-L1 σε ιστό όγκου.

Η αναγνώριση των αποτελεσμάτων χρώσης TMB είναι σημαντικά καλύτερη από τις παραδοσιακές μεθόδους χρώσης, βοηθώντας τους ερευνητές να παρατηρήσουν με μεγαλύτερη ακρίβεια τη μορφολογία του υποκυτταρικού εντοπισμού της πρωτεΐνης.

Στο βασικό ερευνητικό σενάριο της ανάλυσης της ενζυμικής δραστηριότητας, το TMB είναι ένα ειδικό υπόστρωμα για τον προσδιορισμό της δραστικότητας ίχνους υπεροξειδάσης. Με βάση τη χρωματομετρική φασματοφωτομετρία οξείδωσης TMB, η δραστηριότητα του ενζύμου HRP με συγκέντρωση τόσο χαμηλή όσο 1 ng/mL στο δείγμα μπορεί να ανιχνευθεί με ακρίβεια. Είναι μια κλασική πειραματική μέθοδος για τη μελέτη της φυτικής υπεροξειδάσης και της μικροβιακής αντιοξειδωτικής ενζυμικής δράσης. Στην πρώτη γραμμή έρευνας της ενζυμολογίας ενός-μορίου, τα ακινητοποιημένα μόρια TMB μπορούν να δημιουργήσουν εντοπισμένα έγχρωμα ιζήματα υπό την κατάλυση ενός μόνο μορίου ενζύμου HRP.

Η χωρική κατανομή και η καταλυτική κινητική ενός μεμονωμένου μορίου ενζύμου μπορούν να παρατηρηθούν απευθείας μέσω ενός οπτικού μικροσκοπίου, παρέχοντας μια διαισθητική μέθοδο παρατήρησης για τη βασική έρευνα της ενζυμολογίας μεμονωμένων-μοριών. Στο σενάριο ανίχνευσης του υβριδισμού νουκλεϊκού οξέος, το HRP επισημαίνεται στον ανιχνευτή νουκλεϊκού οξέος και η αλληλουχία νουκλεϊκού οξέος στόχος στο δείγμα ανιχνεύεται ποσοτικά με την ένταση χρώματος TMB. Χωρίς την ανάγκη σύνθετου εξοπλισμού ανίχνευσης φθορισμού, μπορεί να ολοκληρωθεί η ποιοτική και ποσοτική ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος χαμηλού-κοστήματος. Έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως σε πειράματα γονιδιακής τυποποίησης και διαλογής γενετικά τροποποιημένων συστατικών σε εργαστήρια επιστημονικής έρευνας βάσης.

Στον τομέα της περιβαλλοντικής παρακολούθησης,τετραμεθυλοβενζιδίνηχρησιμοποιείται ευρέως ως πολύ ευαίσθητο χρωματομετρικό αντιδραστήριο οξείδωσης για ταχεία ανίχνευση ιχνών ποσοτήτων υπεροξειδίου του υδρογόνου και ιόντων βαρέων μετάλλων στο νερό. Στο σενάριο των δοκιμών ασφάλειας του πόσιμου νερού, το σύστημα χρωματομετρικής ανίχνευσης προσομοίωσης υπεροξειδάσης με βάση το TMB μπορεί γρήγορα να ανιχνεύσει υπολειμματικό απολυμαντικό υπεροξειδίου του υδρογόνου στο πόσιμο νερό έως και 0,01 mg/L, πολύ κάτω από τις απαιτήσεις ορίου των εθνικών προτύπων υγιεινής για το πόσιμο νερό.

Η διαδικασία ανίχνευσης δεν απαιτεί μεγάλα όργανα και η ημιποσοτική κρίση μπορεί να ολοκληρωθεί παρατηρώντας το μπλε βάθος του διαλύματος με γυμνό μάτι, το οποίο είναι πολύ κατάλληλο για παρακολούθηση της ποιότητας του νερού έκτακτης ανάγκης στο πεδίο. Στο σενάριο ανίχνευσης ιόντων βαρέων μετάλλων όπως ο μόλυβδος και ο υδράργυρος σε υδάτινα σώματα, η λειτουργοποιημένη υπεροξειδάση προσομοιωμένης νανοχρυσού μπορεί να ανταποκριθεί ειδικά σε ιόντα βαρέων μετάλλων. Μέσω της αλλαγής της έντασης χρώματος TMB, μπορεί να επιτευχθεί υψηλή επιλεκτική ανίχνευση οπτικοποίησης ιόντων βαρέων μετάλλων, με όριο ανίχνευσης έως και 1nM και κόστος ανίχνευσης μόνο 1 τοις εκατό της παραδοσιακής φασματοσκοπίας ατομικής απορρόφησης.

Έχει δείξει εξαιρετικά υψηλή αξία εφαρμογής στον έλεγχο ασφάλειας του αγροτικού πόσιμου νερού και στην ταχεία παρακολούθηση των χώρων απόρριψης βιομηχανικών λυμάτων.

Στον τομέα των δοκιμών ασφάλειας τροφίμων, το TMB είναι το βασικό συστατικό ανάπτυξης χρώματος διαφόρων δοκιμαστικών ταινιών ταχείας ανίχνευσης. Στο σενάριο της αναστολής ενζύμων, η ανίχνευση υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων στα τρόφιμα, τα οργανοφωσφόρα και τα καρβαμιδικά φυτοφάρμακα αναστέλλουν τη δράση της ακετυλοχολινεστεράσης. Μέσω της σύζευξης της καταλυόμενης από υπεροξειδάση αλλαγής χρώματος TMB,-ο έλεγχος επί τόπου των υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων στα λαχανικά μπορεί να ολοκληρωθεί γρήγορα εντός 10 λεπτών.

Η ευαισθησία ανίχνευσης πληροί τις οριακές απαιτήσεις των εθνικών προτύπων ασφάλειας τροφίμων και είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος ταχείας ανίχνευσης για υπολείμματα φυτοφαρμάκων στις εγχώριες γεωργικές αγορές και στα ρυθμιστικά τμήματα βάσης. Στην ανοσοχρωματογραφική ανίχνευση κολλοειδούς χρυσού μικρών μορίων ρύπων όπως η κλενβουτερόλη και η μελαμίνη που προστίθενται παράνομα στα τρόφιμα, η ενισχυμένη χρωματομετρική τεχνολογία που καταλύει το ένζυμο που βασίζεται στο TMB μπορεί να αυξήσει την ευαισθησία ανίχνευσης των παραδοσιακών ταινιών δοκιμής κολλοειδούς χρυσού πάνω από 10 φορές, επιτυγχάνοντας ακριβή επαναληπτική ανίχνευση της παράνομης αρνητικής συγκέντρωσης. χαμένες ανιχνεύσεις.

Στο σενάριο ταχείας ανίχνευσης της μικροβιακής μόλυνσης στα τρόφιμα, η χρήση υπεροξειδίου του υδρογόνου που παράγεται κατά τον μικροβιακό μεταβολισμό, σε συνδυασμό με την χρωματική αντίδραση TMB, μπορεί γρήγορα να ολοκληρώσει την ημιποσοτική εξέταση του συνολικού αριθμού βακτηρίων στα τρόφιμα μέσα σε 2 ώρες. μεταποιητικές επιχειρήσεις. Στην ταχεία ανίχνευση της αφλατοξίνης Β1 σε τρόφιμα με σιτηρά και λάδια, το σύστημα ανίχνευσης ELISA με βάση το TMB έχει ελάχιστο όριο ανίχνευσης 0,1 μg/kg, ικανοποιώντας πλήρως τις αυστηρές οριακές απαιτήσεις της αφλατοξίνης στα εθνικά τρόφιμα. Το κόστος ανίχνευσης είναι πολύ χαμηλότερο από αυτό των μεθόδων ανίχνευσης φασματομετρίας μάζας με μεγάλα όργανα, γεγονός που το καθιστά κατάλληλο για-μελέτες ασφάλειας τροφίμων σιτηρών και λαδιών μεγάλης κλίμακας.