Ρετατρουτίδη(Σύνδεσμος:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) είναι ένας χημικά συντιθέμενος πολυπεπτιδικός αγωνιστής μακράς δράσης GLP-1R/GIPR/GCGR, ο οποίος προορίζεται για τη θεραπεία του διαβήτη τύπου 2 των ενηλίκων, τη διαχείριση βάρους και τη μη αλκοολική λιπώδη ηπατική/μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα. Η ένδειξη για διαβήτη τύπου 2 ενηλίκων αυτού του προϊόντος έχει εγκριθεί για κλινική χρήση στις 29 Αυγούστου 2023. Επιπλέον, η αίτηση για κλινική καταχώριση ενδείξεων για μη αλκοολικό λιπώδες ήπαρ/μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα βρίσκεται στο τελικό στάδιο αναθεώρησης. Υπάρχουν οκτώ αγωνιστές GLP-1R/GIPR/GCGR υπό ανάπτυξη στον κόσμο, εκ των οποίων, το Rita's Retatrutide έχει σημειώσει την ταχύτερη πρόοδο και ξεκίνησε την κλινική δοκιμή τρίτης φάσης τον Ιούνιο του τρέχοντος έτους. Τον ίδιο μήνα, η Rita ανακοίνωσε ότι τα ερευνητικά δεδομένα δεύτερης φάσης της ρετατρουτίδης κυκλοφόρησαν στην ετήσια συνάντηση της ADA, δείχνοντας ότι στις 24 εβδομάδες, η ρετατρουτίδη (1 mg, 4 mg, 8 mg ή 12 mg) έφτασε στο κύριο τελικό σημείο αποτελεσματικότητας αξιολόγηση για παχύσαρκους ή υπέρβαρους συμμετέχοντες χωρίς διαβήτη, με μέση απώλεια βάρους 17,5%. Μεταξύ των δευτερευόντων καταληκτικών σημείων, επιτεύχθηκε μέση απώλεια βάρους 24,2% στο τέλος 48 εβδομάδων θεραπείας. Έχουμε επίσης συνθέσει το πεπτίδιο στο εργαστήριο με βάση τη δημοσιευμένη μέθοδο. Η συγκεκριμένη μέθοδος σύνθεσης θα περιγραφεί εν συντομία και τα συγκεκριμένα βήματα μπορούν να μας σταλούν μέσω email.
Μέθοδος 1:
Τα λεπτομερή βήματα για τη σύνθεση Retarutide με χρήση σύνθεσης στερεάς κατάστασης στο εργαστήριο είναι τα ακόλουθα:
Προετοιμάστε τα απαιτούμενα αντιδραστήρια και όργανα: συμπεριλαμβανομένων αμινοξέων, διχλωρομεθανίου, ανθρακικού καλίου, αιθοξυλιωμένης πυριτικής πηκτής, ακετονιτριλίου, πυριδίνης, Ν-μεθυλομορφολίνης, πηγής διισοπροπυλαιθυλοχλωριδίου, τριφθοροξικού οξέος, DIPEA, Boc προστατευμένων ανανεωτικών καθώς και άλλων μαγνητικών οξέων, , περιστροφικοί εξατμιστές και άλλα όργανα.
(1) Σύνθεση προστατευμένων αμινοξέων Boc: Διαλύστε τα απαιτούμενα αμινοξέα σε διχλωρομεθάνιο, προσθέστε σκόνη ανθρακικού καλίου, ανακατέψτε ομοιόμορφα, προσθέστε αιθοξυλιωμένο πυριτικό πήγμα, συνεχίστε την ανάδευση και στη συνέχεια προσθέστε πυριδίνη και Ν-μεθυλμορφολίνη για να λάβετε προστατευμένα αμινοξέα Boc.
(2) Σύνθεση στερεάς φάσης: Αναμίξτε ακετονιτρίλιο, πηγή διισοπροπυλαιθυλοχλωριδίου και τριφθοροξικό οξύ μαζί, αναδεύστε ομοιόμορφα, προσθέστε παρασκευασμένα προστατευμένα αμινοξέα Boc και συνεχίστε την ανάδευση για να ληφθεί το προϊόν σύνθεσης στερεάς φάσης.
(3) Ομάδα αποπροστασίας: Διαλύουμε τη σύνθεση στερεάς φάσης σε διχλωρομεθάνιο, προσθέτουμε τριφθοροξικό οξύ, ανακατεύουμε ομοιόμορφα και μετά προσθέτουμε DIPEA. Συνεχίστε την ανάδευση για να λάβετε την αποπροστατευμένη σύνθεση στερεάς φάσης.
(4) Καθαρισμός: Διαλύστε την αποπροστατευμένη σύνθεση στερεάς φάσης σε νερό, ρυθμίστε το pH σε περίπου 9.0 με διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου, στη συνέχεια ρυθμίστε το pH σε περίπου 5.0 με οξικό οξύ και, τέλος, ρυθμίστε το pH σε περίπου 5.0 με οξικό οξύ και τέλος, καθιζάνει το καθαρό προϊόν με αιθέρα.
Μέθοδος 2:
Τα λεπτομερή βήματα για τη σύνθεση του Retarutide χρησιμοποιώντας σύνθεση υγρής φάσης στο εργαστήριο είναι τα εξής:
Προετοιμάστε τα απαιτούμενα αντιδραστήρια και όργανα: συμπεριλαμβανομένων αργινίνης, γλυκίνης, οξικού ανυδρίτη, τριαιθυλαμίνης, ανθρακικού καλίου, διχλωρομεθανίου, μεθανόλης, πυριδίνης, Ν-μεθυλομορφολίνης, οξικού ανυδρίτη, οξικού νατρίου και άλλων αντιδραστηρίων, καθώς και όργανα όπως αναδευτήρες, αντλίες κενού, φούρνοι και χρωματογραφικές στήλες.
(1) Διαλύστε αργινίνη και γλυκίνη σε κατάλληλη ποσότητα διχλωρομεθανίου, προσθέστε μια κατάλληλη ποσότητα οξικού ανυδρίτη και τριαιθυλαμίνης και αναδεύστε ομοιόμορφα κάτω από έναν αναδευτήρα.
(2) Μεταφέρουμε το διαλυμένο μείγμα σε φούρνο και το θερμαίνουμε στους 80 βαθμούς C για 1 ώρα για να ακετυλιωθούν τα υπολείμματα αμινοξέων.
(3) Εξουδετερώστε το διάλυμα που αντέδρασε με σκόνη ανθρακικού καλίου για να εξουδετερωθεί το οξικό οξύ στο διάλυμα για να δημιουργηθεί οξικό νάτριο και στη συνέχεια εκχυλίστε το παραγόμενο πεπτίδιο με διχλωρομεθάνιο.
(4) Πλύνετε το εκχυλισμένο διάλυμα πεπτιδίου με μεθανόλη και διηθήστε με αντλία κενού για να ληφθεί το ακατέργαστο πεπτίδιο.
(5) Διαλύστε το ακατέργαστο πεπτίδιο σε κατάλληλη ποσότητα πυριδίνης και Ν-μεθυλομορφολίνης, προσθέστε μια κατάλληλη ποσότητα οξικού ανυδρίτη και οξικού νατρίου και αναδεύστε ομοιόμορφα κάτω από έναν αναδευτήρα.
(5) Διηθήστε το διάλυμα που αντέδρασε με αντλία κενού, πλύνετε το κέικ φίλτρου με μεθανόλη και μετά διηθήστε με αντλία κενού για να λάβετε το τελικό Restarutide.
Μέθοδος 3:
Τα λεπτομερή βήματα για τη σύνθεση του Retarutide με χρήση χημικών μεθόδων στο εργαστήριο είναι τα εξής:
Προετοιμάστε τα απαιτούμενα αντιδραστήρια και όργανα: συμπεριλαμβανομένων αργινίνης, γλυκίνης, οξικού ανυδρίτη, τριαιθυλαμίνης, ανθρακικού καλίου, διχλωρομεθανίου, μεθανόλης, πυριδίνης, Ν-μεθυλομορφολίνης, οξικού ανυδρίτη, οξικού νατρίου και άλλων αντιδραστηρίων, καθώς και όργανα όπως αναδευτήρες, αντλίες κενού, φούρνοι και χρωματογραφικές στήλες.
(1) Διαλύστε αργινίνη και γλυκίνη σε κατάλληλη ποσότητα διχλωρομεθανίου, προσθέστε μια κατάλληλη ποσότητα οξικού ανυδρίτη και τριαιθυλαμίνης και αναδεύστε ομοιόμορφα κάτω από έναν αναδευτήρα.
(2) Μεταφέρουμε το διαλυμένο μείγμα σε φούρνο και το θερμαίνουμε στους 80 βαθμούς C για 1 ώρα για να ακετυλιωθούν τα υπολείμματα αμινοξέων.
(3) Εξουδετερώστε το διάλυμα που αντέδρασε με σκόνη ανθρακικού καλίου για να εξουδετερωθεί το οξικό οξύ στο διάλυμα για να δημιουργηθεί οξικό νάτριο και στη συνέχεια εκχυλίστε το παραγόμενο πεπτίδιο με διχλωρομεθάνιο.
(4) Πλύνετε το εκχυλισμένο διάλυμα πεπτιδίου με μεθανόλη και διηθήστε με αντλία κενού για να ληφθεί το ακατέργαστο πεπτίδιο.
(5) Διαλύστε το ακατέργαστο πεπτίδιο σε κατάλληλη ποσότητα πυριδίνης και Ν-μεθυλομορφολίνης, προσθέστε μια κατάλληλη ποσότητα οξικού ανυδρίτη και οξικού νατρίου και αναδεύστε ομοιόμορφα κάτω από έναν αναδευτήρα.
(6) Διηθήστε το διάλυμα που αντέδρασε με αντλία κενού, πλύνετε το κέικ φίλτρου με μεθανόλη και, στη συνέχεια, διηθήστε με αντλία κενού για να λάβετε το τελικό Restarutide.
Απαιτούνται πολλαπλές αντιδράσεις οργανικής σύνθεσης για να ληφθεί το μόριο-στόχος. Επιπλέον, αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί πολλαπλά οργανικά αντιδραστήρια και πολύπλοκες συνθήκες λειτουργίας, επομένως η χημική σύνθεση του Rotarutide στο εργαστήριο συνήθως δεν είναι κατάλληλη για μεγάλης κλίμακας παραγωγή ή βιομηχανικές εφαρμογές. Για μεγάλης κλίμακας παραγωγή ή βιομηχανικές εφαρμογές, η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος είναι η παρασκευή του Rotarutide μέσω μεθόδων σύνθεσης όπως η βιοσύνθεση ή η σύνθεση υγρής φάσης, οι οποίες είναι σχετικά μικρές σε εργαστηριακή κλίμακα, σχετικά απλές στη λειτουργία και κατάλληλες για την παρασκευή μικρών ποσοτήτων προϊόντων. . Το Retarutide που λαμβάνεται με αυτές τις μεθόδους είναι παρόμοιο ή παρόμοιο σε δομή και βιολογική δραστηριότητα με το Retarutide που συντίθεται με χημικές μεθόδους, αλλά έχει τα πλεονεκτήματα της υψηλότερης απόδοσης και της ευκολότερης παρασκευής. Ταυτόχρονα, έχουν επίσης καλύτερες δυνατότητες εκβιομηχάνισης και ευρύτερες προοπτικές εφαρμογής.
Μέθοδος 4:
Τα λεπτομερή βήματα για τη σύνθεση του Retarutide χρησιμοποιώντας βιολογικές μεθόδους στο εργαστήριο είναι τα εξής:
Προετοιμασία των απαιτούμενων γονιδίων και αντιδραστηρίων: Λάβετε πλασμίδια που περιέχουν το γονίδιο Retatrutide από τη βιβλιοθήκη γονιδίων, μετασχηματίστε τα πλασμίδια με κύτταρα αποδέκτες (όπως το Escherichia coli) και αποκτήστε βακτήρια μηχανικής που περιέχουν το γονίδιο Retatrutide.
(1) Καλλιέργεια βακτηρίων μηχανικής: Κάτω από κατάλληλες συνθήκες θερμοκρασίας, pH και συγκέντρωσης ιόντων, χρησιμοποιήστε ένα μέσο καλλιέργειας για να καλλιεργήσετε βακτήρια μηχανικής, επιτρέποντάς τους να πολλαπλασιαστούν σε μεγάλες ποσότητες.
(2) Εκχύλιση Ρεταρουτίδης: Τα καλλιεργημένα τεχνικά βακτήρια συνθλίβονται χρησιμοποιώντας θραυστήρα και τα κυτταρικά θραύσματα διαχωρίζονται από το Ρεταρουτίδη χρησιμοποιώντας μεθόδους όπως η υπερδιήθηση και η καθίζηση για να ληφθεί το ακατέργαστο προϊόν.
(3) Καθαρισμός Retarutide: Το ακατέργαστο Retarutide καθαρίζεται χρησιμοποιώντας τεχνολογία χρωματογραφίας για να ληφθεί Retarutide υψηλής καθαρότητας.
Ανίχνευση και αναγνώριση Rotarutide: Χρησιμοποιήστε υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης, φασματομετρία μάζας, πυρηνικό μαγνητικό συντονισμό και άλλες τεχνικές για την ανίχνευση και τον προσδιορισμό της δομής του καθαρισμένου Rotarutide.
Η εξίσωση χημικής αντίδρασης για τη βιολογική σύνθεση του Retarutide στο εργαστήριο περιλαμβάνει κυρίως τις χημικές αντιδράσεις κατά τη διαδικασία γονιδιακής έκφρασης, συμπεριλαμβανομένων δύο βημάτων: μεταγραφή και μετάφραση.
Μεταγραφή: Το δίκλωνο DNA ανοίγει, χρησιμοποιώντας έναν κλώνο ως πρότυπο για τη σύνθεση κλώνων RNA, κάτι που απαιτεί τη συμμετοχή RNA πολυμεράσης. Η εξίσωση της αντίδρασης είναι η εξής:
DNA δίκλωνο: DNApol → mRNA+DNApol
Μετάφραση: Τα ριβοσώματα συνδέονται με το mRNA για να συνθέσουν πεπτιδικές αλυσίδες, μια διαδικασία που απαιτεί τη συμμετοχή αμινοξέων και ενέργειας. Η εξίσωση της αντίδρασης είναι η εξής:
Ριβόσωμα+mRNA → Πεπτιδική αλυσίδα+GDP+Pi+H2O
Πεπτιδική αλυσίδα+ATP → Πεπτιδική αλυσίδα+AMP+PPi
Μεταξύ αυτών, το DNApol αντιπροσωπεύει την DNA πολυμεράση. Το MRNA αντιπροσωπεύει το αγγελιοφόρο RNA. Τα ριβοσώματα αντιπροσωπεύουν ριβοσώματα. Οι πεπτιδικές αλυσίδες αντιπροσωπεύουν πολυπεπτιδικές αλυσίδες. Το ΑΕΠ αντιπροσωπεύει τη διφωσφορική γουανοσίνη. Το Pi αντιπροσωπεύει το ανόργανο φωσφορικό οξύ. Το H2O αντιπροσωπεύει το νερό. Το ATP αντιπροσωπεύει την τριφωσφορική αδενοσίνη. Το AMP αντιπροσωπεύει τη μονοφωσφορική αδενοσίνη. Το PPi αντιπροσωπεύει ανόργανο πυροφωσφορικό. Αυτές οι αντιδράσεις δημιουργούν τις πεπτιδικές αλυσίδες που απαιτούνται για τη σύνθεση του Retarutide, οι οποίες στη συνέχεια υποβάλλονται σε επεξεργασία και τροποποιούνται στα επόμενα στάδια για να ληφθεί Retarutide.
Οι παραπάνω είναι κοινές μέθοδοι για τη σύνθεση του Rotarutide στο εργαστήριο, καθεμία με διαφορετικά πλεονεκτήματα, μειονεκτήματα και εύρος χρήσης. Το εργαστήριο χρησιμοποιεί συνήθως μεθόδους σύνθεσης υγρής φάσης και σύνθεσης στερεάς φάσης για παραγωγή μικρής κλίμακας για ερευνητική και πειραματική χρήση. Η βιομηχανική παραγωγή, από την άλλη πλευρά, υιοθετεί έναν συνδυασμό βιοσύνθεσης και παραγωγής υγρής/στερεάς φάσης για παραγωγή μεγάλης κλίμακας για να καλύψει τη ζήτηση της αγοράς. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι αυτές οι μέθοδοι απαιτούν αυστηρή βελτιστοποίηση συνθηκών και έλεγχο της διαδικασίας για τη διασφάλιση της ποιότητας και της καθαρότητας του τελικού προϊόντος.