Alpha - σκόνη αμυλάσης, Όνομα συστήματος 1,4 - alpha - d - γλυκάνη υδρολάση γλυκάνης, επίσης γνωστή ως υγροποιημένη αμυλάση ή ένζυμο υγροποιίας -1, 4 -διτρινάση. Κίτρινο καφέ στερεό σκόνη ή κίτρινο καφέ έως σκούρο καφέ υγρό, με περιεκτικότητα σε υγρασία 5% έως 8%. Διαλυτή σε νερό, αδιάλυτο σε αιθανόλη ή αιθέρα. Σύμφωνα με τους κανονισμούς της FAO/WHO, η ADI δεν έχει ειδικούς περιορισμούς. Χρησιμοποιείται κυρίως για την υδρολύοντας άμυλο για την παραγωγή μαλτόζης, γλυκόζης και σιροπιού, καθώς και για την παραγωγή δεξτρίνης, μπύρας, κίτρινου κρασιού, αλκοόλ, σάλτσας σόγιας, ξιδιού, χυμού φρούτων και γλουταμινικού μονοσοδίων. Χρησιμοποιείται επίσης στην παραγωγή ψωμιού για τη βελτίωση της ζύμης, όπως η μείωση του ιξώδους της ζύμης, η επιτάχυνση της διαδικασίας ζύμωσης, η αύξηση της περιεκτικότητας σε ζάχαρη και η επιβράδυνση της γήρανσης του ψωμιού. Χρησιμοποιείται για την προεπεξεργασία των πρώτων υλών δημητριακών σε τρόφιμα βρέφους και μικρού παιδιού. Επιπλέον, χρησιμοποιείται επίσης στην επεξεργασία λαχανικών. Περίπτωση χρήσης, με βάση το Bacillus subtilis άλφα αμυλάση (6000IU/g), το ποσό προσθήκης είναι περίπου 0,1%
Η άλφα αμυλάση, ως ενδονουκλεάση ικανή να υδρολύει -1,4 -γλυκολοσιδικούς δεσμούς σε μόρια αμύλου, έχει γίνει ένα από τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα ένζυμα στη βιομηχανική βιοτεχνολογία λόγω των αποτελεσματικών καταλυτικών ιδιοτήτων της για την υψιαψία αμύλου. Οι εφαρμογές του καλύπτουν περισσότερους από δέκα τομείς όπως η επεξεργασία τροφίμων, η βιομηχανία ζύμωσης, η εκτύπωση κλωστοϋφαντουργικών προϊόντων και η βαφή, η ιατρική και η υγεία, η προστασία των χαρτιών και του περιβάλλοντος και αποδεικνύουν τη δυνατότητα συνεχούς επέκτασης στις αναδυόμενες τεχνολογίες.
Η εφαρμογή στον κλάδο των τροφίμων διατρέχει ολόκληρη την αλυσίδα επεξεργασίας πρώτων υλών, βελτιστοποίησης της διαδικασίας και καινοτομίας των προϊόντων και η αντοχή της θερμοκρασίας, η προσαρμοστικότητα του pH και η καταλυτική απόδοση έχουν γίνει το κλειδί για την τεχνολογική αναβάθμιση της βιομηχανίας.
1. Βιομηχανία ψησίματος: διπλή βελτιστοποίηση του όγκου και της γεύσης
Στην παραγωγή ψωμιού, το κατεστραμμένο άμυλο στο αλεύρι υδρολύεται για να παράγει δεξτρίνη και μείωση των σακχάρων, παρέχοντας περισσότερα υποστρώματα για ζύμωση ζύμης. Τα πειραματικά δεδομένα δείχνουν ότι η προσθήκη 0,01% μυκητιακής άλφα αμυλάσης μπορεί να αυξήσει τον όγκο του ψωμιού κατά 15% -20%, μειώνοντας ταυτόχρονα τη μείωση των σακχάρων στην αντίδραση Maillard, με αποτέλεσμα αύξηση 20% -30% στο χρώμα του δέρματος του ψωμιού. Στην εφαρμογή της κατεψυγμένης ζύμης, αυτό το ένζυμο μπορεί να καθυστερήσει τη γήρανση του αμύλου, να μειώσει τη σκληρότητα του προϊόντος κατά 40% μετά την απόψυξη και να διατηρήσει μια μαλακή υφή για έως και 7 ημέρες.
2. Βιομηχανία ζυθοποιίας: συνεργιστική βελτίωση της αποτελεσματικότητας και της ποιότητας
Beer Brewing: Η ανθεκτική σε υψηλή θερμοκρασία άλφα αμυλάση (σταθερή δραστηριότητα σε 90-95 βαθμούς) μπορεί να αντικαταστήσει 30%βύνη, να συντομεύσει τον χρόνο υγροποίησης του αμύλου από 60 λεπτά σε 15 λεπτά, να αυξήσει την ταχύτητα διήθησης του WORT κατά 25%και να αυξήσει την απόδοση του εκχυλίσματος κατά 5%. Τα παρασκευάσματα ενζύμου που προέρχονται από το bacillus licheniformis μπορούν να αυξήσουν τη ζύμωση της μπύρας κατά 3% και να μειώσουν την περιεκτικότητα σε υπολειμματική ζάχαρη κάτω από 1,2%.
Παραγωγή Baijiu: Προσθέτονταςalpha - σκόνη αμυλάσηςκαι το παρασκεύασμα συμπλέγματος ενζύμου SacCharifying στο στάδιο της σακχαροποίησης, ο ρυθμός χρησιμοποίησης του αμύλου αυξήθηκε από 85%σε 92%και ο ρυθμός απόδοσης υγρού αυξήθηκε κατά 8%. Ταυτόχρονα, η παραγωγή πετρελαίου Fusel μειώθηκε, καθιστώντας το σώμα του ποτού πιο καθαρή.
3. Κατασκευή ζάχαρης αμύλου: ο κόμβος μετατροπής από τις πρώτες ύλες σε υψηλή τιμή - προστιθέμενα προϊόντα
Στην παραγωγή γλυκόζης, το άμυλο υγροποιείται σε δεξτρίνη με τιμή de 15 - 20 και στη συνέχεια μετατρέπεται σε γλυκόζη μέσω ενζυματικής δράσης. Η χρήση ανθεκτικής άλφα αμυλάσης υψηλής θερμοκρασίας (όπως το γενετικά τροποποιημένο ένζυμο BLA) μπορεί να αυξήσει τη θερμοκρασία υγροποίησης από 85 μοίρες σε 95 μοίρες, να μειώσει τον χρόνο αντίδρασης κατά 50%και να μειώσει την κατανάλωση ενέργειας κατά 30%. Στην παραγωγή σιροπιού βύνης, ελέγχοντας τις συνθήκες ενζυματικής υδρόλυσης (ρΗ 5,5-6,0, 60 μοίρες), μπορούν να ληφθούν προϊόντα με περιεκτικότητα σε ζάχαρη βύνης άνω του 60%, ικανοποιώντας τη ζήτηση της βιομηχανίας τροφίμων για χαμηλή γλυκύτητα και σιρόπι αντι-κρυστάλλωσης.
4. Ανάπτυξη υγιεινής διατροφής: Λειτουργία εξισορρόπησης και καθαρή επισήμανση
Για ειδικό φαγητό για διαβήτη, η ανθεκτική δεξτρίνη μπορεί να παρασκευαστεί με συνεργασία με pullulanase. Η περιεκτικότητα σε διατροφικές ίνες είναι μεγαλύτερη από 85%και η τιμή GI (γλυκαιμικός δείκτης) είναι μικρότερη από 30. Στην παραγωγή ψωμιού χωρίς γλουτένη, αυτό το ένζυμο μπορεί να βελτιώσει τα χαρακτηριστικά επεξεργασίας των μη γλουτένιων πρώτων υλών, όπως τα μεγάλα ζυμαρικά και το αλεύρι quinoa, έτσι ώστε ο συγκεκριμένος όγκος του προϊόντος να αυξάνεται από 2,5 ml/g έως 3,8 ml/g και το αισθητικό σκορ των παραδοσιακών ψωμιών όπως το ψωμί.
Με την αποτελεσματική μετατροπή των πρώτων υλών με βάση το άμυλο σε ζυμώσιμα σάκχαρα, έχει γίνει ένα βασικό εργαλείο για την παραγωγή βιοκαυσίμων, οργανικών οξέων και αμινοξέων. Η θερμική σταθερότητα και η καταλυτική του απόδοση επηρεάζουν άμεσα την οικονομική βιωσιμότητα της βιομηχανίας.
1. Αιθανόλη καυσίμου: μια βασική τεχνολογία για τη μετάβαση ενέργειας
Στην παραγωγή αιθανόλης καυσίμου καλαμποκιού, η άλφα αμυλάση (όπως το Spezyme) ® η συνεργιστική επίδραση της άλφα και η γλυκόζη αμυλάσης μπορεί να αυξήσει το ποσοστό μετατροπής του αμύλου σε πάνω από 98%. Η θερμοφιλική - αμυλάση που βελτιώθηκε με τεχνολογία επεξεργασίας γονιδίων μπορεί να διατηρήσει τη δραστηριότητα σε 95 βαθμούς, συνδυάζοντας τις διεργασίες υγροποίησης και σακχαροποίησης (διαδικασία SSF), μειώνοντας την κατανάλωση ατμού κατά 40%και συντομεύοντας τον κύκλο ζύμωσης στις 48 ώρες. Το 2023, η παγκόσμια παραγωγή βιοαιθανόλης θα φτάσει τα 105 εκατομμύρια τόνους, με την άλφα αμυλάση να συνεισφέρει πάνω από το 60% της αποδοτικότητας μετατροπής του αμύλου.
2. Οργανικά οξέα και αμινοξέα: μια γέφυρα από πρώτες ύλες σε υψηλά προϊόντα αξίας -
Παραγωγή κιτρικού οξέος: Η υγροποίηση καλαμποκιού άλφα-αμυλάσης αμυλο-αμυλάσης σε τιμή 10-12, ακολουθούμενη από ζύμωση από τον Aspergillus Niger. Η απόδοση του κιτρικού οξέος αυξάνεται από άμυλο 1,2kg/kg σε άμυλο 1,5kg/kg και ο χρόνος ζύμωσης μειώνεται κατά 20%.
Το γλουταμικό νάτριο (MSG): Στο στάδιο σακκαρισμού των πρώτων υλών του αμύλου, προσθέτοντας ένα σύνθετο παρασκεύασμα άλφα αμυλάσης και αμυλάσης μπορεί να αυξήσει την απόδοση γλυκόζης από 90%σε 95%, να αυξήσει το ρυθμό μετατροπής του γλουταμικού μονοσοδίου στο 65%και να μειώσει την κατανάλωση ενέργειας ανά μονάδα κατά 25%.
3. Βιολογικά υλικά: Μετατροπή από άμυλο σε βιοαποικοδομήσιμα πλαστικά
Η συνεργιστική επίδραση με τη λιπάση μπορεί να παρασκευάσει σύνθετα υλικά πολυπαρακικού οξέος αμύλου, τα οποία έχουν αντοχή σε εφελκυσμό 35MPa και μια επιμήκυνση σε διάλειμμα αυξήθηκε στο 120%, ικανοποιώντας τις απαιτήσεις μηχανικής απόδοσης των υλικών συσκευασίας. Στην παραγωγή πολυυδροξυαλκαειδικών (PHA), η προεπεξεργασία ενζύμου αύξησε την αποτελεσματικότητα σακκαρισμού αμύλου κατά 40%, αύξησε την απόδοση PHA από 0,8g/L σε 1,2g/L και μειωμένο κόστος παραγωγής κατά 30%.
Κλωστοϋφαντουργική βιομηχανία: Τεχνολογική ανακάλυψη στην πράσινη εκτύπωση και βαφή
Με την αποτελεσματική αφαίρεση του πολτού αμύλου από τα υφάσματα, γίνεται η προετοιμασία του βασικού ενζύμου για διαδικασίες προεπεξεργασίας κλωστοϋφαντουργίας και βαφής. Τα χαμηλά χαρακτηριστικά της - θερμοκρασίας και η προστασία της προστασίας του περιβάλλοντος προάγουν τον μετασχηματισμό της βιομηχανίας προς την πράσινη κατασκευή.
1. Διαδικασία Desizing: Διπλή βελτιστοποίηση της αποτελεσματικότητας και της προστασίας του περιβάλλοντος
Το παραδοσιακό χημικό desizing πρέπει να πραγματοποιηθεί σε 90 - 95 βαθμούς, δημιουργώντας μεγάλη ποσότητα αλκαλικών λυμάτων. Η χρήση της μέσης θερμοκρασίας - η αμυλάση (με σταθερή δραστικότητα σε 50-60 βαθμούς) μπορεί να μειώσει τον χρόνο από 120 λεπτά σε 45 λεπτά, να μειώσει την κατανάλωση ατμού κατά 60%και να μειώσει το COD (χημική ζήτηση οξυγόνου) από απόβλητα από 5000mg/L έως 800mg/L. Στο Denim DeSizing, το ένζυμο εργάζεται συνεργιστικά με κυτταρινάση για να αυξήσει το φινίρισμα της επιφάνειας κατά 30%, το βάθος της βαφής κατά 15%και να μειώσει το ποσοστό αποβολής χρωστικής indigo κατά 20%.
2. Βιολογική στίλβωση: ακριβής έλεγχος των ιδιοτήτων επιφάνειας υφάσματος
Το σύνθετο παρασκεύασμα με κυτταρινάση μπορεί να αφαιρέσει επιλεκτικά το επιφανειακό fuzz από βαμβακερά υφάσματα, βελτιώνοντας την ομαλότητα της επιφάνειας κατά 40% και αυξάνοντας το επίπεδο αντιθερμού από το επίπεδο 3 στο επίπεδο 4 - 5. Κατά την επεξεργασία του μεταξιού, αυτό το ένζυμο μπορεί να μειώσει την ακαμψία των υφασμάτων κατά 25%, διατηρώντας παράλληλα την αρχική του λάμψη, ικανοποιώντας τις απαιτήσεις των υφασμάτων υψηλής ποιότητας.
3. Περιβαλλοντική εκτύπωση και βαφή: Από το τέλος της επεξεργασίας σωλήνων έως τη μείωση της ρύπανσης προέλευσης
The use of alpha amylase desizing process can reduce the cost of wastewater treatment by 40%, and its biodegradability (96 hour degradation rate>90%) πληροί το OEKO - TEX Standard 100 Περιβαλλοντικό Πρότυπο Περιβάλλοντος. Στην προ -- θεραπεία της ψηφιακής εκτύπωσης, αυτό το ένζυμο μπορεί να αντικαταστήσει την παραδοσιακή καυστική σόδα desizing, αυξάνοντας την απόδοση του χρώματος κατά 15% και την ταχύτητα χρώματος κατά 0,5 επίπεδα, μειώνοντας παράλληλα την απόρριψη λυμάτων κατά 30%.
Ιατρική και υγεία: Μηχανή καινοτομίας από διάγνωση ασθενειών έως λειτουργικά τρόφιμα
Οι εφαρμογές στο φαρμακευτικό πεδίο καλύπτουν τα διαγνωστικά αντιδραστήρια, τα παρασκευάσματα του πεπτικού ενζύμου και την ανάπτυξη των βιοϋλικών και την εξειδίκευση και την ασφάλεια τους έχουν γίνει βασικές κλινικές εφαρμογές.
1. Διάγνωση ασθένειας: "βιοδείκτες" οξείας παγκρεατίτιδας
The detection of serum alpha amylase activity is the preferred screening indicator for acute pancreatitis (AP). Enzyme activity can increase to more than three times the normal value (>120U/L) within 2-12 hours after onset, and the duration of elevated urinary amylase is longer (5-10 days). Combined with lipase detection (specificity>95%), η διαγνωστική ακρίβεια μπορεί να αυξηθεί στο 98%και ο ρυθμός εσφαλμένης διάγνωσης μπορεί να μειωθεί κατά 30%. Στην εξέταση της κυστικής ίνωσης (CF), η δοκιμή δραστηριοτήτων άλφα αμυλάσης Saliva μπορεί να εντοπίσει περισσότερο από το 85% των ασθενών νωρίς, γεγονός που είναι πιο βολικό από τις παραδοσιακές δοκιμές ιόντων χλωριούχου ιδρώτα.
2. Παρασκευάσματα πεπτικού ενζύμου: τα βασικά συστατικά των λειτουργικών τροφίμων
Για τους ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα, ένα σύνθετο παρασκεύασμα ενζύμου (που περιέχει άλφα αμυλάση, λιπάση, πρωτεάση) μπορεί να αυξήσει το ρυθμό πέψης λίπους κατά 40% και ρυθμό απορρόφησης υδατανθράκων κατά 35%. Η προσθήκη ανθεκτικής στην άλφα αμυλάση ανθεκτική στην όξινη (σταθερή δραστηριότητα ρΗ 2.0) σε βρέφη μπορεί να αυξήσει την πεπτικότητα του αμύλου από 70%σε 90%, μειώνοντας την επίπτωση των πεπτικών συμπτωμάτων όπως η φούσκωμα και η διάρροια κατά 50%.
3. Βιοϋλικά: Καινοτόμοι μεταφορείς για συστήματα παράδοσης φαρμάκων
Starch nanoparticles modified with α - amylase (particle size 100-200nm) can be used as anti-cancer drug carriers, with a drug loading capacity of 25% and a 24-hour release rate of>80% σε ένα προσομοιωμένο εντερικό περιβάλλον (ρΗ 6.8). Σε σκευάσματα από του στόματος ινσουλίνης, το ένζυμο σε συνδυασμό με την τεχνολογία ενθυλάκωσης χιτοζάνης μπορεί να αυξήσει τη βιοδιαθεσιμότητα του φαρμάκου στο 15%, μειώνοντας τη συχνότητα φαρμάκων κατά 70% σε σύγκριση με τις παραδοσιακές ενέσεις.
Βιομηχανία χαρτιού: Τεχνική υποστήριξη από την επεξεργασία πρώτων υλών έως την αναβάθμιση των προϊόντων
Ρυθμίζοντας την απόδοση των επικαλύψεων αμύλου,alpha - σκόνη αμυλάσηςέχει γίνει ένα βασικό εργαλείο για τη βελτίωση της ποιότητας των προϊόντων και τη μείωση της κατανάλωσης ενέργειας στη βιομηχανία χαρτιού. Η εφαρμογή του καλύπτει ολόκληρη τη διαδικασία της εξάντλησης της επικάλυψης, του μεγέθους και των αποβλήτων.
1. Βελτίωση επίστρωσης αμύλου: ακριβής έλεγχος των ιδιοτήτων χαρτιού
Στη διαδικασία επικάλυψης, η μερική αποικοδόμηση του αμύλου από την άλφα αμυλάση (τιμή DE 5-10) μπορεί να μειώσει το ιξώδες της επικάλυψης κατά 30%, να αυξήσει την ταχύτητα επικάλυψης στα 1500m/min και να βελτιώσει τη γυαλιστερό χαρτοκιβώτιο κατά 20%. Η βαθμολογία εκτύπωσης βελτιώνεται επίσης κατά 15 πόντους (σε κλίμακα 100 σημείων). Στην παραγωγή χαρτιού ειδικότητας, το ένζυμο και η πολυβινυλική σύνθετη επικάλυψη μπορεί να αυξήσει την αντοχή στο νερό του χαρτιού κατά 40%, ικανοποιώντας τις απαιτήσεις των υλικών συσκευασίας τροφίμων.
2. Βελτιστοποίηση της διαδικασίας εφαρμογής κόλλας: διπλά οφέλη της διατήρησης της ενέργειας και της προστασίας του περιβάλλοντος
Η προ -θεραπεία του κόμμι με ροδίνη με άλφα αμυλάση μπορεί να μειώσει τη θερμοκρασία μεγέθους από 85 μοίρες σε 60 μοίρες, να μειώσει την κατανάλωση ατμού κατά 30%και να μειώσει την ποσότητα υλικού των ούλων κατά 20%. Στη διαδικασία απομάκρυνσης μελανιού από χαρτί αποβλήτων, η συνεργιστική επίδραση αυτού του ενζύμου και της λιπάσης μπορεί να αυξήσει το ποσοστό απομάκρυνσης μελανιού σε 95%, να αυξήσει την λευκότητα κατά 5%και να μειώσει το ποσοστό απώλειας ινών σε κάτω από 3%.
3. Βιοπουλκία: Η μετάβαση από χημικές σε βιολογικές μεθόδους
Το σύνθετο παρασκεύασμα άλφα αμυλάσης και ξυλανάσης μπορεί να αντικαταστήσει το 20% των παραγόντων χημικής πολτοποίησης, μειώνοντας τον αριθμό πολτού κάπα κατά 15% διατηρώντας την ίδια απόδοση αντοχής. Στην αυλή αχύρου, η προεπεξεργασία ενζύμου μπορεί να αυξήσει την αποτελεσματικότητα του διαχωρισμού των ινών κατά 30%, να μειώσει την κατανάλωση ενέργειας κατά 40%και να μειώσει το φορτίο ρύπανσης των λυμάτων κατά 90%.
Αναδυόμενα πεδία: Εφαρμογές διασυνοριακών συνόρων από συνθετική βιολογία έως διαστημική τεχνολογία
Με την ανάπτυξη της τεχνολογίας επεξεργασίας γονιδίων και της νανοτεχνολογίας, το καινοτόμο δυναμικό έχει αποδειχθεί στην κοπή - πεδία άκρων όπως η συνθετική βιολογία, η υποστήριξη διαστημικής ζωής και η βιοαποικοδόμηση.
1. Συνθετική βιολογία: Σχεδιασμός και εξέλιξη τεχνητών ενζύμων
Μέσα από τις κατευθυνόμενες τεχνικές εξέλιξης, οι ερευνητές έχουν αναπτύξει μεταλλάξεις που είναι ανθεκτικές σε υψηλές θερμοκρασίες (110 βαθμοί) και οξύ (pH3.0), με μισή - ζωή 10 φορές μεγαλύτερη από τον άγριο τύπο. Στην οδό τεχνητής σύνθεσης αμύλου, η συνεργιστική δράση με συνθετάση αμύλου μπορεί να αυξήσει την παραγωγή αμύλου από 0,1g/L έως 5g/L, παρέχοντας αποθέματα πηγής άνθρακα για συστήματα υποστήριξης διαστημικής ζωής.
2. Τεχνολογία χώρου: Υλικό ποδηλασία σε κλειστά οικοσυστήματα
Στο σύστημα βιοεπιλογενών υποστήριξης ζωής (BLSS) του Διεθνούς Διαστημικού Σταθμού (ISS), οι ουσίες που βασίζονται σε άμυλο σε περιττώματα αστροναύτη αποσυντίθενται με ποσοστό ανάκτησης 90%, παρέχοντας ανόργανα άλατα για καλλιέργεια φυτών. Στο πείραμα προσομοίωσης βάσης του Άρη, το ένζυμο λειτουργεί συνεργικά με φωτοσυνθετικά βακτήρια για την αύξηση της αποτελεσματικότητας σταθεροποίησης του διοξειδίου του άνθρακα κατά 25% και του ρυθμού παραγωγής οξυγόνου κατά 15%.
3. Βιοαποδότηση: Πράσινη διακυβέρνηση της ρύπανσης του εδάφους
Magnetic nanoparticles modified with α - amylase (Fe ∝ O ₄ @ SiO ₂ - AMY) can efficiently adsorb polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in soil, with an adsorption capacity of 50mg/g and a degradation rate of>80% σε 24 ώρες σε 30 μοίρες. Κατά την αποκατάσταση του μολυσμένου του πετρελαίου, το ένζυμο σε συνδυασμό με τη λιπάση μπορεί να αυξήσει το συνολικό ρυθμό αποικοδόμησης υδρογονανθράκων (TPH) σε 90% και να μειώσει την περίοδο αποκατάστασης σε 6 μήνες.
Προετοιμασία του άλφα - σκόνη αμυλάσης:
Η διαδικασία κατασκευής του φορέα PXMJ19-APH213 έχει ως εξής:
Το γονίδιο APH213 ενισχύθηκε από τον φορέα XK99E με τους εκκινητές APH213F και APH213R. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν ήταν οι εξής:
APH213F: CCGGATATCAGCTTCACGCTGCCGCAAGCAC
APH213R: ccgaagcttaattctgtttcctgtgtgaaattg
Οι συνθήκες PCR είναι οι εξής: 95 βαθμοί για 4 λεπτά. 95 βαθμοί 30s, 62 βαθμοί 30s, 72 βαθμούς 1min, 35 κύκλοι. 72 βαθμοί 7 λεπτά.
Ο σχεδιασμός των παραπάνω εκκινητών οδήγησε στο σχηματισμό του σημείου διακοπής του ECORV στο ανάντη του γονιδίου APH213 και του HindiII σημείου διακοπής στο κατάντη κατά τη διάρκεια της ενίσχυσης του γονιδίου APH213. Η αλληλουχία νουκλεοτιδίων του γονιδίου APH213 φαίνεται στο SEQ ID ΝΟ: 4, Το προϊόν PCR ανακτήθηκε και αφομοιώθηκε με ECORV και HindIII και στη συνέχεια συνδέθηκε με το διάνυσμα PXMJ-19, το οποίο επίσης αφομοιώθηκε με ECORV και Hindiii μέσω της λιγάσης T4DNA για να ληφθεί ο φορέας PXMJ19-APH213.
Η διαδικασία ενίσχυσης του φορέα PXMJ19-APH213 έχει ως εξής:
Α. Προσθέστε 3mL μέσου καλλιέργειας LB και 1,5UL 34mg/mL αντιβιοτικού χλωραμφενικόλη σε σωλήνα φυγοκεντρότητας 50ml.
Β. Επιλέξτε Escherichia coli DH5 με φορέα PXMJ19-APH213 μεταφορά στο παραπάνω μέσο και καλλιέργεια σε 37 μοίρες και 230 σ.α.λ. για 12 ώρες για να ενισχύσετε το πλασμίδιο PXMJ19-APH213.
Γ. Εξαγάγετε το πλασμίδιο PXMJ19-APH213 σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ εκχύλισης πλασμιδίου.
Ενισχυμένο από το γονιδίωμα Bacillus subtilis με εκκινητή amyf και Amyr - Οι εκκινητές που χρησιμοποιούνται για το γονίδιο αμυλάσης έχουν ως εξής:
Amyr: ccgctcgagtcagtggtggtggtggtgatggggaagagaaccgcttaag;
Amyf: CCGAAGCTTGAAAGGAGGACCCTAATGTTTGCAAAACGATTCAAAACC;
Οι συνθήκες PCR είναι οι εξής: 95 βαθμοί για 4 λεπτά. 95 βαθμοί 30s, 62 βαθμοί 30s, 72 βαθμούς 2 λεπτά, 35 κύκλοι. 72 βαθμοί 7 λεπτά.
Ο σχεδιασμός των παραπάνω εκκινητών κάνει - κατά τη διάρκεια της ενίσχυσης του γονιδίου αμυλάσης - Η αλληλουχία E3 SD σχηματίζεται στην ανάντη του γονιδίου αμυλάσης και η ετικέτα ιστιδίνης σχηματίζεται στην κατάντη. Η ανάντη θέση περιορισμού ενδονουκλεάσης είναι HindiII, και η κατάντη περιοχή περιορισμού Endonuclease είναι XHHOI.
Το προϊόν PCR ανακτήθηκε και αφομοιώθηκε με XHOI και Hindiii και στη συνέχεια συνδέθηκε με το φορέα PXMJ19-APH213 το οποίο επίσης αφομοιώθηκε με XHOI και HindIII μέσω της Ligase DNA T4 για να ληφθεί ο ανασυνδυασμένος φορέας έκφρασης PXMJ19-APH213-Amy.
Το ανασυνδυασμένο διάνυσμα έκφρασης PXMJ19 - APH213-AMY μεταφέρθηκε σε Escherichia coli για προ-ενίσχυση. Το μέσο καλλιέργειας ήταν μέσο LB και η συγκέντρωση χλωραμφενικόλης ήταν 50 ug/ml. Μετά την εκχύλιση, μεταφέρθηκε σε corynebacterium glutamicum με τη μέθοδο ηλεκτρικού μετασχηματισμού και καλλιεργήθηκε σε μέσο αποκατάστασης LBHIS σε 30 μοίρες, με τη συγκέντρωση χλωραμφενικόλη 30 μ./Ml.
Μεταφέρετε τους μετασχηματιστές που καλλιεργούνται σε μια τριγωνική φιάλη 250ml που περιέχει μέσο 50ml για καλλιέργεια. Το μέσο είναι μέσο BHI. Η κατάσταση καλλιέργειας είναι 30 βαθμοί, 230 σ.α.λ., 48 ώρες.
Α. Φυγοκεντρίστε την κουλτούρα ανασυνδυασμένων βακτηρίων στις 12000 σ.α.λ., 4 μοίρες και 5 λεπτά για να ληφθεί - Το υπερκείμενο της αμυλάσης.
Β. Θα περιέχει - Το υπερκείμενο της αμυλάσης υπόκειται σε χρωματογραφία συγγένειας. Πρώτον, εξισορροπήστε τη στήλη νικελίου με ρυθμιστικό διάλυμα Α - Το υπερκείμενο της αμυλάσης διηθήθηκε και φορτώθηκε στην ισορροπημένη στήλη νικελίου και στη συνέχεια ο όγκος τριών στηλών εξισορροπήθηκε περαιτέρω με το ρυθμιστικό Α στο επίπεδο βάσης. Εκχυλίσματα με 100mmol διαλύματος Β, συλλέξτε το εκλούσμα έκλουσμα και συλλέξτε 0,5ml ανά σωλήνα.
Buffer Α: 300mm NaCl, 20mm Tris, ph8.0 buffer; Buffer Β: 300mm NaCl, 250mm ιμιδαζόλη, 20mm Tris, ph8.0 buffer.
Γ. Για εκείνους που περιέχουν -, το έκλουσμα της αμυλάσης αφαλάται μέσω της στήλης αφαλάτωσης για να ληφθεί καθαρισμένη - διάλυμα αμυλάσης, αποθηκευμένη σε - 20 βαθμό;
Το buffer που χρησιμοποιείται για αφαλάτωση είναι ρυθμιστικό διάλυμα 50mm PBS με ρΗ 7,0.
Δημοφιλείς Ετικέτες: Alpha - σκόνη αμυλάσης CAS 9000-90-2, προμηθευτές, κατασκευαστές, εργοστάσιο, χονδρική, αγορά, τιμή, όγκος, προς πώληση