Η Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. είναι ένας από τους πιο έμπειρους κατασκευαστές και προμηθευτές πρωτεϊνάσης κ σκόνης cas 39450-01-6 στην Κίνα. Καλώς ήρθατε στη χονδρική χονδρική πώληση υψηλής ποιότητας proteinase k powder cas 39450-01-6 εδώ από το εργοστάσιό μας. Καλή εξυπηρέτηση και λογική τιμή είναι διαθέσιμα.
Σκόνη Πρωτεϊνάσης Κείναι μια εξαιρετικά αποτελεσματική, μη{0}}πρωτεάση σερίνης που χρησιμοποιείται ευρέως στη μοριακή βιολογία και τη βιοχημεία, κυρίως για την αποικοδόμηση πρωτεϊνών και την αφαίρεση μολυσματικών πρωτεϊνών από παρασκευάσματα νουκλεϊκών οξέων. Προέρχεται από τον μύκητα Engyodontium album (πρώην Tritirachium album) και διατηρεί τη δραστηριότητά του σε ένα ευρύ φάσμα θερμοκρασιών (20-60 βαθμοί) και pH (4-12), ακόμη και όταν επωάζεται σε διάλυμα που περιέχει SDS (0,5-1%) ή ουρία (4Μ) υπό συνθήκες μετουσίωσης.
Το ένζυμο διασπά αποτελεσματικά ένα ευρύ φάσμα πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένων των RNase και DNase, διασπώντας πεπτιδικούς δεσμούς (υδρολύοντας κατά προτίμηση το καρβοξυλικό άκρο των αλειφατικών/αρωματικών αμινοξέων) και επομένως χρησιμοποιείται για την αφαίρεση νουκλεάσης στην εκχύλιση DNA/RNA για να διασφαλιστεί η ακεραιότητα του νουκλεϊκού οξέος. Επιπλέον, χρησιμοποιείται συνήθως στην πέψη των ιστών (π.χ. σε δείγματα ενσωματωμένα σε παραφίνη{{3}), στη λύση των κυττάρων και στις πρωτεϊνικές μελέτες.
Η σκόνη πρωτεϊνάσης Κ παρέχεται συνήθως σε λυοφιλοποιημένη μορφή, η οποία είναι εξαιρετικά σταθερή (-20 βαθμούς για μακροχρόνια αποθήκευση) και πρέπει να διαλυθεί σε ρυθμιστικό διάλυμα (π.χ. Tris-HCl, EDTA) πριν από τη χρήση. Η δραστηριότητά του εξαρτάται από το Ca2+, αλλά οι χηλικοί παράγοντες όπως το EDTA αναστέλλουν μόνο εν μέρει τη δράση του ενζύμου. Πρέπει να αποφεύγεται η αυτοδιάσπαση κατά το χειρισμό και συνιστάται η απενεργοποίηση θερμότητας στους 65 βαθμούς. Λόγω της ισχυρής του ικανότητας υδρόλυσης πρωτεϊνών, απαιτείται προσεκτική προστασία για την αποφυγή επαφής με το δέρμα ή τους βλεννογόνους.
Σκόνη πρωτεϊνάσης k, επίσης γνωστή ως Πρωτεϊνάση Κ ή EC 3.4.21.14, είναι μια πρωτεάση σερίνης που απομονώνεται και καθαρίζεται από το Tritirachium album Limber. Από την πρώτη του απομόνωση από τον Wolfgang Ebeling et al. Το 1974, η πρωτεϊνάση Κ έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη βιοχημεία, τη μοριακή βιολογία, την ιατρική και τη βιομηχανία λόγω της υψηλής δραστηριότητάς της και της ευρείας εξειδίκευσης του υποστρώματος.
Εφαρμογές στη Βιοχημεία και τη Μοριακή Βιολογία
Στη διαδικασία της εκχύλισης DNA και RNA, η κύρια λειτουργία της πρωτεϊνάσης Κ είναι να αποικοδομεί πρωτεΐνες που συνδέονται με νουκλεϊκά οξέα, επιτρέποντας στο DNA ή το RNA να είναι ελεύθερα σε διάλυμα για μετέπειτα εκχύλιση και καθαρισμό. Λόγω της σταθερότητας και της υψηλής δραστηριότητάς της σε μετουσιωτικούς παράγοντες όπως η ουρία και το SDS, η πρωτεϊνάση Κ χρησιμοποιείται συνήθως για την απομόνωση πλασμιδίων ή γονιδιωματικού DNA και RNA.
Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να αναστείλει τη δραστηριότητα της RNAse και να προστατεύσει το RNA από την αποικοδόμηση.
1. Εξαγωγή DNA και RNA
Εκχύλιση DNA: Η πρωτεάση Κ μπορεί να υδρολύσει τις ιστόνες που συνδέονται με το DNA, επιτρέποντας στο DNA να διασπαστεί στο διάλυμα. Στη συνέχεια, οι ακαθαρσίες απομακρύνθηκαν με διάφορες μεθόδους όπως εκχύλιση με χλωροφόρμιο φαινόλης, καθίζηση με αιθανόλη κ.λπ., και συλλέχθηκε καθαρισμένο DNA.
Εκχύλιση RNA: Κατά τη διαδικασία εκχύλισης RNA, τα ένζυμα RNA υπάρχουν συνήθως στο περιβάλλον και το ίδιο το σύστημα δειγμάτων μπορεί επίσης να περιέχει ένζυμα RNA, καθιστώντας το RNA πολύ ευαίσθητο στην αποικοδόμηση. Προσθέτοντας μια μικρή ποσότητα
2. Τεχνολογία in situ υβριδισμού
Τεχνολογία in situ υβριδισμού, η πρωτεϊνάση Κ χρησιμοποιείται συνήθως για επεξεργασία προ-υβριδισμού για την πέψη των πρωτεϊνών που περιβάλλουν το DNA στόχο, την αύξηση της πιθανότητας σύνδεσης του ανιχνευτή στο νουκλεϊκό οξύ στόχο και την ενίσχυση του σήματος υβριδοποίησης. Ωστόσο, θα πρέπει να σημειωθεί ότι όταν η συγκέντρωση της πρωτεϊνάσης Κ είναι πολύ υψηλή, ο χρόνος πέψης είναι πολύ μεγάλος ή η θερμοκρασία επώασης είναι πολύ υψηλή, μπορεί να προκαλέσει βλάβη στη δομή του κυττάρου, οδηγώντας σε αποβολή τμημάτων ιστού και εξαφάνιση κυτταρικών πυρήνων, επηρεάζοντας έτσι τα αποτελέσματα υβριδισμού. Επομένως, σε πρακτικές εφαρμογές, είναι απαραίτητος ο αυστηρός έλεγχος της συγκέντρωσης και του χρόνου θεραπείας της πρωτεϊνάσης Κ.
3. Απενεργοποίηση και απολύμανση ιών
Η πρωτεάση Κ, λόγω της ισχυρής πρωτεολυτικής της δράσης, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την απενεργοποίηση και την απολύμανση του ιού. Έρευνες έχουν δείξει ότι η επεξεργασία καθαρού νερού και οικιακών λυμάτων με μια ορισμένη συγκέντρωση πρωτεϊνάσης Κ μπορεί να απενεργοποιήσει αποτελεσματικά τους ιούς. Η πρωτεάση Κ, ως απολυμαντικό που απενεργοποιεί τον ιό, μπορεί να μειώσει την πιθανή βλάβη που προκαλούν τα συμβατικά οξειδωτικά χημικά απολυμαντικά στο ανθρώπινο σώμα και η παραγωγή και η μεταφορά της είναι ασφαλείς χωρίς μη αναστρέψιμη περιβαλλοντική ρύπανση.
4. Western blotting και παλμική ηλεκτροφόρηση
Η πρωτεάση Κ έχει επίσης χρησιμοποιηθεί ευρέως στην παρασκευή DNA χρωμοσωμάτων για παλμική ηλεκτροφόρηση, στύπωμα Western και άλλα πειράματα. Σε πειράματα Western blot, η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αφαίρεση μη-ειδικών πρωτεϊνών από το δείγμα, βελτιώνοντας την ειδικότητα και την ευαισθησία του στυπώματος. Σε πειράματα παλμικής ηλεκτροφόρησης, η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να αποικοδομήσει τις πρωτεϊνικές ακαθαρσίες σε δείγματα DNA και να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα της ηλεκτροφόρησης.
5. Ανίχνευση και ταυτοποίηση πρωτεϊνών
Σκόνη πρωτεϊνάσης kμπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση και την ταυτοποίηση ορισμένων πρωτεϊνών. Για παράδειγμα, στη μελέτη της μεταδοτικής σπογγώδους εγκεφαλοπάθειας (TSE), η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την πέψη των πρωτεϊνών σε δείγματα ιστού εγκεφάλου και για τον εντοπισμό της παρουσίας πρωτεϊνών πριόν ανιχνεύοντας την αντίσταση των παθογόνων πριόντων στην πρωτεϊνάση Κ. Επιπλέον, η πρωτεϊνάση Κ μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για πειράματα όπως ο προσδιορισμός της εντόπισης των ενζύμων στα άκρα των πρωτεϊνών στο c. (όπως η λυσοζύμη και η ριβονουκλεάση Α).
Εφαρμογές στην Ιατρική και τη Βιομηχανία
Κλινική χρήση: Η πρωτεάση Κ έχει κάποια φαρμακευτική αξία στην ιατρική. Για παράδειγμα, η θεραπεία της δυσπεψίας με γαστρική πρωτεάση, η θεραπεία της βρογχίτιδας με όξινη πρωτεάση, η θεραπεία της αγγειίτιδας με ελαστάση, κ.λπ.
Ανίχνευση και διάγνωση ιών: Η πρωτεάση Κ έχει επίσης πιθανές εφαρμογές στην ανίχνευση και διάγνωση ιών. Με την πέψη των πρωτεϊνών στο δείγμα του ιού και την έκθεση του νουκλεϊκού οξέος του ιού, παρέχει ευκολία για μετέπειτα έλεγχο νουκλεϊκού οξέος.
2. Βιομηχανικός τομέας
Βιομηχανία δέρματος: Η Protease K χρησιμοποιείται στη βιομηχανία δέρματος για αποτρίχωση και θεραπεία μαλάκυνσης, η οποία μπορεί να εξοικονομήσει χρόνο και να βελτιώσει τις συνθήκες υγιεινής της εργασίας.
Κλωστοϋφαντουργία: Η πρωτεάση Κ μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε κλωστοϋφαντουργικές βιομηχανίες όπως η αποκόλληση μεταξιού.
Βιομηχανία τροφίμων: Η πρωτεάση Κ μπορεί να χρησιμοποιηθεί στη βιομηχανία τροφίμων για τρυφερότητα κρέατος, διαύγαση αλκοόλ κ.λπ.
Απορρυπαντικό: Το απορρυπαντικό πλυντηρίων ρούχων με προσθήκη ενζύμων είναι ένα νέο προϊόν στα απορρυπαντικά. Το απορρυπαντικό ρούχων που περιέχει αλκαλική πρωτεάση μπορεί να αφαιρέσει λεκέδες αίματος και ρύπους πρωτεΐνης από τα ρούχα. Αλλά όταν το χρησιμοποιείτε, προσέξτε να μην αγγίζετε το δέρμα για να αποφύγετε την καταστροφή της πρωτεΐνης στην επιφάνεια του δέρματος και την πρόκληση αλλεργικών αντιδράσεων όπως εξάνθημα και έκζεμα.
Το μοριακό βάρος της πρωτεϊνάσης Κ είναι περίπου 28900 daltons (28,9 kDa) και υπάρχουν επίσης βιβλιογραφικές αναφορές 29,3 kDa. Η αλληλουχία αμινοξέων και η τρισδιάστατη χωρική του δομή είναι πολύ παρόμοια με τη σουμπτιλισίνη της οικογένειας πρωτεάσης σερίνης, αλλά υπάρχουν επίσης μερικά μοναδικά χαρακτηριστικά.
Δομή δισουλφιδικού δεσμού: Τα μόρια πρωτεάσης Κ περιέχουν δισουλφιδικούς δεσμούς, οι οποίοι αυξάνουν τη σταθερότητά τους και τους επιτρέπουν να διατηρούν τη δραστηριότητα σε ένα ευρύ φάσμα pH και συνθήκες υψηλής θερμοκρασίας.
Θέσεις δέσμευσης Ca 2⁺:Σκόνη πρωτεϊνάσης kπεριέχει δύο θέσεις δέσμευσης Ca2+, οι οποίες, αν και μακριά από το ενεργό κέντρο, είναι κρίσιμες για τη διατήρηση της καταλυτικής δραστηριότητας του ενζύμου. Η απομάκρυνση του Ca 2+ θα προκαλέσει την απώλεια της πρωτεάσης Κ περίπου του 80% της δραστηριότητάς της και η επανεισαγωγή Ca 2+ μπορεί να αποκαταστήσει μόνο εν μέρει τη δραστηριότητά της.
Καταλυτική τριάδα: Η πρωτεάση Κ έχει μια καταλυτική τριάδα Asp-His69-Ser224, η οποία αποτελεί βασική δομή για την υδρολυτική της δραστηριότητα.
Μηχανισμός δράσης
Η πρωτεάση Κ μπορεί κατά προτίμηση να υδρολύσει εστερικούς και πεπτιδικούς δεσμούς δίπλα στο C-άκρο υδρόφοβων αμινοξέων, αμινοξέων που περιέχουν θείο-και αρωματικών αμινοξέων, υδρολύοντας πρωτεΐνες σε βραχέα πεπτίδια. Ο μηχανισμός δράσης του περιλαμβάνει κυρίως τα ακόλουθα βήματα:
Σύνδεση υποστρώματος ενζύμου: Αφού αναμειχθεί η πρωτεάση Κ με το υπόστρωμα, το υπόστρωμα δεσμεύεται στην ενεργό θέση του ενζύμου, σχηματίζοντας ένα σύμπλεγμα υποστρώματος ενζύμου.
Καταλυτική αντίδραση: Υπό τη δράση της ενεργού θέσης, ο πεπτιδικός δεσμός του υποστρώματος υδρολύεται για να σχηματιστεί ένα προϊόν που διαχωρίζεται από το ένζυμο.
Η ισχυρή επίδραση αποικοδόμησης της πρωτεάσης Κ την καθιστά βασικό αντιδραστήριο σε διάφορες βιοχημικές αντιδράσεις, ειδικά σε διαδικασίες εξαγωγής DNA και RNA. Η πρωτεάση Κ μπορεί να αποικοδομήσει αποτελεσματικά πρωτεΐνες που συνδέονται με νουκλεϊκά οξέα, να απελευθερώσει νουκλεϊκά οξέα και να αναστείλει τη δραστηριότητα των νουκλεασών, μειώνοντας την αποικοδόμηση των νουκλεϊκών οξέων κατά την εκχύλιση.
Μέθοδοι αποθήκευσης και χρήσης
1. Μέθοδος αποθήκευσης
Η πρωτεάση Κ πρέπει να φυλάσσεται σε ψυγείο στους -20 βαθμούς για να αποφευχθεί η επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη. Εάν το διάλυμα καταβυθιστεί, δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί ξανά. Κατά την παρασκευή λυοφιλοποιημένης-αποξηραμένης σκόνης πρωτεϊνάσης Κ, είναι απαραίτητο να προσθέσετε ένα προστατευτικό κατάψυξης-για να διατηρήσετε υψηλό επίπεδο περιεκτικότητας σε στερεά. Ωστόσο, η πρωτεϊνάση Κ τείνει να συσσωματώνεται και να σχηματίζει ιζήματα σε συγκεντρώσεις 20 mg/mL ή υψηλότερες, γεγονός που αποτελεί σημαντική πρόκληση για λυοφιλοποίηση υψηλής περιεκτικότητας σε στερεά.
2. Οδηγίες χρήσης
Όταν χρησιμοποιείται πρωτεϊνάση Κ, είναι απαραίτητο να παρασκευαστεί ένα διάλυμα κατάλληλης συγκέντρωσης σύμφωνα με τις πειραματικές απαιτήσεις. Συνήθως, η συγκέντρωση εργασίας της πρωτεϊνάσης Κ είναι 0,05-0,2 mg/mL. Σε πειράματα εκχύλισης DNA και RNA, η εκχύλιση ενός δείγματος απαιτεί περίπου 0,1 mg πρωτεϊνάσης Κ. Για να βελτιωθεί η αποτελεσματικότητα της εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, η δόση της πρωτεϊνάσης Κ μπορεί να αυξηθεί κατάλληλα. Όταν χρησιμοποιείται πρωτεϊνάση Κ για in situ υβριδισμό, Western blotting και άλλα πειράματα, είναι απαραίτητο να ελέγχεται αυστηρά η συγκέντρωση και ο χρόνος επεξεργασίας της για να αποφευχθεί η καταστροφή της κυτταρικής δομής.
Σκόνη πρωτεϊνάσης k, ως εξαιρετικά δραστική και ειδική για υπόστρωμα πρωτεάση σερίνης, έχει ένα ευρύ φάσμα εφαρμογών στη βιοχημεία, τη μοριακή βιολογία, την ιατρική και τη βιομηχανία. Μπορεί να αποικοδομήσει πρωτεΐνες που συνδέονται με νουκλεϊκά οξέα και απελευθερώνουν νουκλεϊκά οξέα. Αύξηση της ευκαιρίας για τους ανιχνευτές να συνδέονται με νουκλεϊκά οξέα-στόχους στην τεχνολογία in situ υβριδισμού. Χρησιμοποιείται για αδρανοποίηση και απολύμανση ιών. Αφαιρέστε τις ακαθαρσίες πρωτεΐνης σε πειράματα στυπώματος Western και ηλεκτροφόρησης παλμού. Έχει φαρμακευτική αξία στον τομέα της ιατρικής. Χρησιμοποιείται σε βιομηχανικούς τομείς όπως η επεξεργασία δέρματος, η κλωστοϋφαντουργία, η βιομηχανία τροφίμων και η κατασκευή απορρυπαντικών. Ωστόσο, κατά τη χρήση της πρωτεϊνάσης Κ, πρέπει να δίνεται προσοχή στη μέθοδο αποθήκευσης και στις συνθήκες χρήσης της για να διασφαλιστεί η σταθερότητα και η δραστηριότητά της.
ανεπιθύμητη αντίδραση
Η πρωτεϊνάση Κ είναι μια ευρέως-πρωτεάση σερίνης που χρησιμοποιείται ευρέως στη μοριακή βιολογία, τη βιοχημεία και την ιατρική έρευνα λόγω των μοναδικών ενζυματικών ιδιοτήτων και της σταθερότητάς της. Ως μορφή λυοφιλοποιημένης-σκόνης, η σκόνη Πρωτεϊνάσης Κ παίζει καθοριστικό ρόλο σε πειράματα όπως η εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος, η πέψη πρωτεϊνών και η ομογενοποίηση των ιστών. Ωστόσο, η χρήση οποιουδήποτε βιολογικού αντιδραστηρίου ενέχει πιθανούς κινδύνους και οι ανεπιθύμητες αντιδράσεις του μπορεί να αφορούν την υγεία των χειριστών και την ασφάλεια του πειραματικού περιβάλλοντος.
Αλλεργική Αντίδραση
Κλινικές εκδηλώσεις
Η πρωτεϊνάση Κ μπορεί να προκαλέσει αντιδράσεις υπερευαισθησίας τύπου Ι, με συμπτώματα όπως:
Δερματικές αντιδράσεις: εξάνθημα, κνησμός, κνίδωση, ερύθημα και σε σοβαρές περιπτώσεις μπορεί να εμφανιστεί αγγειακό οίδημα.
Αναπνευστικά συμπτώματα: βήχας, συριγμός, δυσκολία στην αναπνοή, μπορεί να προκαλέσουν κρίσεις άσθματος.
Συστηματικά συμπτώματα: ζάλη, σφίξιμο στο στήθος, πόνος στο στήθος, μυϊκός πόνος, έξαψη και σε σπάνιες περιπτώσεις, μπορεί να εμφανιστεί αναφυλακτικό σοκ.
Μηχανισμός εμφάνισης
Η πρωτεϊνάση Κ, ως ετερόλογη πρωτεΐνη, μπορεί να αναγνωριστεί από το ανοσοποιητικό σύστημα ως αντιγόνο, διεγείροντας τα Β κύτταρα να παράγουν ειδικά αντισώματα IgE. Όταν ένα άτομο έρχεται ξανά σε επαφή, η IgE συνδέεται με υποδοχείς στην επιφάνεια των μαστοκυττάρων, προκαλώντας αντιδράσεις αποκοκκίωσης και απελευθέρωσης φλεγμονωδών μεσολαβητών όπως ισταμίνη και λευκοτριένια, οδηγώντας σε αλλεργικά συμπτώματα.
Παράγοντες που επηρεάζουν
Ατομική ευαισθησία: Η γενετική ευαισθησία και το ιστορικό αλλεργιών (όπως άσθμα και έκζεμα) αυξάνουν τον κίνδυνο.
Οδός έκθεσης: Η εισπνοή σωματιδίων σκόνης ή η άμεση επαφή με το δέρμα είναι πιο πιθανό να προκαλέσει αλλεργίες.
Δόση και συχνότητα: Η μακροχρόνια ή{0}}χρήση υψηλής δόσης μπορεί να αυξήσει την πιθανότητα ευαισθητοποίησης.
Ερεθισμός του δέρματος και των βλεννογόνων
Κλινικές εκδηλώσεις
Ερεθισμός του δέρματος: Η μακροχρόνια έκθεση μπορεί να προκαλέσει ερυθρότητα, ξηρότητα, απολέπιση, ακόμη και δερματίτιδα εξ επαφής.
Ερεθισμός των ματιών: Η σκόνη που εισέρχεται στα μάτια μπορεί να προκαλέσει καυστικό πόνο, δακρύρροια και συμφόρηση του επιπεφυκότα.
Μηχανισμός εμφάνισης
Η πρωτεολυτική δραστηριότητα της Πρωτεϊνάσης Κ μπορεί να διαταράξει τον φραγμό της κεράτινης στιβάδας του δέρματος, ενώ η φυσική τριβή των σωματιδίων της σκόνης εντείνει τον ερεθισμό. Ο επιπεφυκότας είναι πιο ευαίσθητος σε χημικές βλάβες λόγω του λεπτού βλεννογόνου και των άφθονων αιμοφόρων αγγείων του.
Δημοφιλείς Ετικέτες: proteinase k powder cas 39450-01-6, προμηθευτές, κατασκευαστές, εργοστάσιο, χονδρική, αγορά, τιμή, χύμα, προς πώληση